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Association Française des Techniques Hydrothermales

 

 

 

 Association Française des Techniques Hydrothermales ARCHIVES

Modification de la norme nf T 90-431

  • Recherche et dénombrement des Legionella spp et Legionella pneumophila – Méthode par ensemencement direct et après concentration par filtration sur membrane ou centrifugation.
  • Version du 1er novembre 2014 : applicable dans les 6 mois après la parution

Prélèvement et transport

  • Volume de prélèvement : min 500mL (v.2003 : 1L)
  • Transport en enceinte isotherme SANS glace (v.2003 : sous glace, avec contrôle de la T° à (5±3)°C à partir de 12h après prélèvement)

TRAITEMENT DES ECHANTILLONS

NF t90-431 - 2003 NF T90-431 - 2014
  EMN = eau propre
1 ensemencement direct 1 ensemencement en direct
de 0,2mL de 0,2mL
1 ensemencement direct 1 ensemencement en direct
de 0,2mL de 0,2mL

1 concentration après filtration 1 concentration après filtration sur membrane puis traitements :

  • - Ensemencement direct de 1mL du concentrât
  • - Traitement acide de 1mL du concentrât
  • - Traitement par chaleur de 1mL du concentrât

1 concentration après filtration sur membrane de 10mL

1 concentration après filtration sur membrane de 100mL

Incubation à (36±2)°C  Incubation à (36±2)°C

Lecture des résultats

  • 2 lectures intermédiaires à partir du 3e jour
  • lecture définitive 8-11 jours (v.2003 8-10j)

Dénombrement positif et confirmation

  • Repiquage et incubation à (36±2)°C entre 2 et 4 jours

Limite de détection et limite de quantification

NF t90-431 - 2003 NF T90-431 - 2014

limite de détection

  • - 50 UFC/Lde 0,2mL

limite de détection

  • - 10 UFC/L

limite de quantification

  • - 250 UFC/L

limite de qantification

  • - 10 UFC/L

Exemple de calculs selon NF T90-431 - 2014

  • Présence de colonies à partir de la filtration de 100mL uniquement :
    - Résultat = nbre de colonies * 10 UFC/L (n’’<100)
  • Présence de colonies à partir de la filtration de 10mL uniquement :
    - Résultat = nbre de colonies * 100 UFC/L (n’<100)
  • Présence de colonies à partir de l’ensemencement direct :
    - Résultat = nbre de colonies * 5000 UFC/L (n<150)

Expression des résultats :

  • Résultats provisoires obtenus lors des lectures intermédiaires :
    - Identification confirmée, numération provisoire
  • Résultats définitifs confirmés obtenus lors de la lecture définitive
    Legionella spp < 10 UFC/L dont Legionella pneumophila < 10 UFC/L

Conclusion - retour d’expérience – labo agréé

Volume annuel d’analyse pour recherche des légionelles :

1000 échantillons EMN (2650 au total)

Mise en application de la NF T90-431 (2014) : 04/05/15

Résultats NF t90-431(2003) : 295 Résultats NF T90-431(2014) : 700
<50 UFC/L : 96,3 % <10 UFC/L : 91,7 %
50 UFCL/L : 1,7 % 10<...<50 UFCL : 8 %
>50 UFCL/L : 2 % >50 UFCL : 0,3 %